豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus ,PCV）是近年來新發(fā)現(xiàn)的引起仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥的必需病原。PCV2具有致病性，主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥，還可引起豬皮炎和腎病綜合癥、間質(zhì)性肺炎和繁殖障礙等。主要感染斷奶仔豬，以發(fā)熱、漸進性消瘦、呼吸困難和黃疸等癥狀為特征，死亡率5％－30％，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。檢測特異性豬圓環(huán)病毒抗體，可作為豬場圓環(huán)病疫苗的免疫監(jiān)測及該病輔助檢測指標。

        本試劑盒采用ELISA方法檢測豬血清中特異性抗圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體。本試劑靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【試劑組成】

【操作程序】

1．洗滌液配制用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2．樣本稀釋   用樣本稀釋液（5號液）將待檢血清樣本按1：40稀釋，如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3．加樣反應(yīng)   每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4．加酶反應(yīng)   除空白對照孔外，每孔加酶結(jié)合物（1號液） 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5．顯色反應(yīng)   加底物液（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液（6號液）1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍色會變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

      陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。

      以空白對照調(diào)零，用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算。

【注意事項】

1.試劑盒于2-8℃保存，有效期12個月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

5.試驗樣本應(yīng)為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。

6. 37℃孵育時，建議使用水浴箱。如無條件，可在溫箱中放置濕盒進行反應(yīng)并同時用不干膠膜封蓋板孔。

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