一步法RT-PCR試劑盒
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品 牌：QIAGEN英文名：QIAGEN OneStep RT-PCR Kit 中文名：一步法RT-PCR試劑盒 用于靈敏、特異性的一步法RT-PCR快速方便的單管反應(yīng)適合各種RNA模板，無需優(yōu)化反應(yīng)條件*的酶組合，確保反應(yīng)的高特異性和高靈敏度經(jīng)優(yōu)化的緩沖體系確保了高效的逆轉(zhuǎn)錄和擴增過程
- 產(chǎn)品描述
一步法RT-PCR試劑盒
一步法RT-PCR試劑盒包含Omniscript逆轉(zhuǎn)錄酶和Sensiscript逆轉(zhuǎn)錄酶的混合物、HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer、dNTP混合液和Q-Solution。Q-Solution是一種新型的輔助劑，有助于實現(xiàn)“困難”模板（如：高GC含量的模板）的高效擴增。簡單的單管反應(yīng)體系構(gòu)建和優(yōu)化的試劑盒組分確保了結(jié)果成功且靈敏度高。
特點 | 參數(shù) |
| 應(yīng)用 | Gene-expression analysis, virus detection |
| 酶活 | Reverse transcription, 5' -> 3' exonuclease activity |
| 預(yù)混液 | No |
| 反應(yīng)類型 | One-step RT-PCR |
| real-time或終點法PCR | Endpoint |
| 樣本/目標(biāo)類型 | RNA template |
| 單一或多重 | Single |
| 有/無熱啟動酶 | With hotstart |
性能
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit提供方便的規(guī)格，可使用RNA模板進行高靈敏度和特異性的RT-PCR。試劑盒中包含優(yōu)化的組分，可在同一反應(yīng)混合液中進行逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增，完成"一步式"反應(yīng)。*的酶組合和專門研發(fā)的反應(yīng)緩沖液確保在一個管中進行高效、高特異性的逆轉(zhuǎn)錄和PCR，無需優(yōu)化。試劑盒提供的新型的、雙陽離子PCR緩沖液確保在寬退火溫度范圍內(nèi)得到高產(chǎn)量的特異性PCR產(chǎn)物。使用Q-Solution可提高不理想的RT-PCR的表現(xiàn)，這種*的輔助劑可幫助逆轉(zhuǎn)錄并高效擴增具有高GC含量和復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板。
原理
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可對多種RNA模板進行簡單、靈敏的一步式RT-PCR。
QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有為逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)特別設(shè)計的酶。*組合的Omniscript和Sensiscrip逆轉(zhuǎn)錄酶對RNA模板有高度親和性，確保RNA逆轉(zhuǎn)錄的靈敏度達到1 pg到2 µg。逆轉(zhuǎn)錄完成后，升溫至95°C，15分鐘，活化HotStarTaq DNA Polymerase同時使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。這種方法可減少引物二聚體等非特異性擴增產(chǎn)物的生成，并減少背景的影響，確保RT-PCR的高靈敏度和可重復(fù)性。
退火溫度范圍寬
引物的退火溫度取決于堿基對的組成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的濃度和反應(yīng)的離子環(huán)境。QIAGEN PCR Buffers含有K+和NH4+，使用該緩沖液可在很寬的溫度范圍內(nèi)增加特異性PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量。其原理是破壞非特異性結(jié)合的引物對，提供更加可靠的反應(yīng)環(huán)境，減少繁瑣的溫度優(yōu)化過程。相反，如使用僅含K+的PCR或一步式RT-PCR緩沖液，PCR退火溫度的范圍較窄，可靠性較差。
QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer專為提高逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的效率而設(shè)計。該緩沖液含有新型輔助劑，可防止逆轉(zhuǎn)錄酶對PCR擴增的抑制，而這是一步式RT-PCR中常見的問題。該緩沖液確保在較大的溫度范圍和Mg2+濃度范圍內(nèi)，引物與模板特異性結(jié)合，可對多種RNA模板進行高效的RT-PCR擴增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，這是可修飾核酸熔解行為的新型輔助劑。Q-Solution可促進高GC含量或含較多二級結(jié)構(gòu)的模板的逆轉(zhuǎn)錄和擴增。 使用Q-Solution可簡化復(fù)雜模板RT-PCR的優(yōu)化過程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有試劑，可進行快速、簡便的RT-PCR，用于多種靈敏的應(yīng)用（見表）。
| QIAGEN OneStep RT-PCR Kit 組分 | 特點 |
|---|---|
| HotStarTaq DNA Polymerase | 高度特異性產(chǎn)物 |
| Sensiscript and Omniscript Reverse Transcriptases | RNA初始量的范圍大 (1 pg–2 µg) 高靈敏度 |
| OneStep RT-PCR Buffer | 無需優(yōu)化 反轉(zhuǎn)錄酶不會抑制PCR 抑制RNases |
| Q-Solution | 促進GC含量高的模板的 |
操作流程
使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、簡單的進行RT-PCR反應(yīng)體系構(gòu)建。無論是何種應(yīng)用，即無論是病毒檢測、分子診斷研究還是基因表達，您只需將所有試劑在一個離心管中混合即可開始PCR擴增。反應(yīng)混合液含有逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)所需的所有試劑，無需添加其他試劑即可開始反應(yīng)（參見下表）。
應(yīng)用
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit適用于RT-PCR分析，包括：
- 病毒檢測
- 單細胞RT-PCR
- 基因表達分析
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